CaMKⅡ调控脂多糖诱导的心肌细胞内钙、ROS的作用机制研究

摘要

目的 探究钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)调控脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞胞浆Ca2+、活性氧(ROS)的分子作用机制.方法 大鼠心肌细胞(H9C2)经10.0μg/ml的LPS处理48 h,构建心肌炎体外细胞模型.实验分为对照组、LPS组(10.0μg/ml的LPS作用48 h)、KN93+LPS组[5.0μmol/L的KN93(CaMKⅡ抑制剂)预处理1 h,再加入10.0μg/ml的LPS刺激48 h].采用荧光探针法,观察细胞内Ca2+、ROS含量水平;RT-qPCR法检测CaMKⅡ、受磷蛋白(PLB)、心肌细胞肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA)、无翅型小鼠乳腺肿瘤病毒整合位点家族成员4(Wnt4)、β-连环蛋白(β-catenin)、原癌基因(c-Myc)、G1/S-特异性周期蛋白D1(Cyclin D1)、诱导型一氧化氮(iNOS)、白介素10(IL-10)基因mRNA表达水平;Western Blot检测细胞内CaMKⅡ蛋白含量.结果 与对照组比较,LPS组胞浆Ca2+以及细胞内ROS水平增加;CaMKⅡ的mRNA及蛋白表达增加(P0.05).结论 CaMKⅡ可能通过调控细胞内钙调控蛋白PLB、SERCA,Wnt通路蛋白Wnt4、Cyclin D1,以及细胞因子iNOS、IL-10的表达,从而抑制LPS诱导的心肌胞浆Ca2+及ROS水平增加.