重组人干扰素对手足口病大鼠的治疗作用及对Toll样受体/髓样分化因子相关信号分子的影响

摘要

目的观察重组人干扰素(rh IFN)α-2b对手足口病大鼠的治疗作用及其对Toll样受体(TLR)/髓样分化因子(MyD88)相关信号分子的影响。方法取郑州儿童医院感染性疾病科分离的肠道病毒71-BJ(EV71-BJ),测定EV71-BJ毒株对7日龄无特定病原级Sprauge Dawley(SD)大鼠的半数致死量(LD50)。另取7日龄无特定病原级SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组及rh IFNα-2b低、中、高剂量组,每组12只。模型组及rh IFNα-2b低、中、高剂量组大鼠一次性腹腔注射15倍稀释的LD50EV71-BJ毒株100μL,对照组一次性腹腔注射生理盐水100μL,根据各组大鼠的表现进行临床评分,染毒第4天临床评分3~4分者即为建模成功。取rh IFNα-2b低、中、高剂量组建模成功的大鼠,分别给予2、4、8万单位rh IFNα-2b溶入0.2 mL生理盐水中肌肉注射,对照组、模型组大鼠肌肉注射0.2 mL生理盐水,每日1次,连续给药3 d。末次干预后24 h脱颈处死各组大鼠,取腹主动脉血,检测各组大鼠全血T淋巴细胞亚群CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+及血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-4、IL-10水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠脑组织中TLR2、My D88、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子相关因子6(TRAF-6)mRNA相对表达量;Western blot法检测各组大鼠脑组织中TLR2、My D88、NF-κB、TRAF-6蛋白相对表达量。结果各组大鼠全血CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+、血清IFN-γ、IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、My D88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量比较差异均有统计学意义(F=72.310、57.107、98.928,F=161.175、28.874、22.637,F=108.493、122.121、120.966、154.783,F=151.001、194.357、89.442、210.210,P<0.05)。与对照组比较,模型组及rh IFNα-2b各剂量组大鼠全血CD4^+、CD4^+/CD8^+及血清IFN-γ水平均显著降低(P<0.05),全血CD8^+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、My D88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。与模型组比较,rh IFNα-2b各剂量组大鼠全血CD4^+、CD4^+/CD8^+及血清IFN-γ水平均显著升高(P<0.05),全血CD8^+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、MyD88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。与rh IFNα-2b低剂量组比较,rh IFNα-2b中、高剂量组大鼠全血CD4^+、CD4^+/CD8^+及血清IFN-γ水平均显著升高(P<0.05),全血CD8^+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、MyD88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。与rh IFNα-2b中剂量组比较,rh IFNα-2b高剂量组大鼠全血CD4^+、CD4^+/CD8^+及血清IFN-γ水平均显著升高(P<0.05),全血CD8^+、血清IL-4、IL-10水平及脑组织中TLR2、MyD88、NF-κB、TRAF-6 mRNA和蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论rh IFNα-2b可有效改善手足口病大鼠的症状和免疫状态,其中高剂量rh IFNα-2b效果最佳,其作用可能与抑制TLR/MyD88信号通路中相关基因和蛋白表达有关。