重组人白血病抑制因子的原核表达及优化

摘要

目的 在大肠杆菌中表达重组人白血病抑制因子(HLIF)蛋白,并探索其高效表达的条件.方法 将HLIF重组质粒转化至大肠杆菌BL21,分别给予不同诱导时间(4、8、12、16、20、24 h)、不同浓度大肠杆菌(吸光度值分别为0.5、0.6、0.8、1.0)、不同诱导温度(20、25、30、37、42℃)、不同浓度诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mmol·L-1)、不同浓度乙酸(0.0、0.1、0.2、0.3、0.4 mmol·L-)进行培养,蛋白电泳考马斯亮蓝染色后,采用Image J软件分析HLIF蛋白的相对表达量,观察不同干预条件对HLIF表达的影响.结果 不同诱导时间下HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=22.088,P＜0.05),诱导16 h时的HLIF蛋白相对表达量显著高于诱导4、8、12、20、24 h(P ＜0.05).不同浓度(以吸光度值表示)大肠杆菌诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=17.153,P＜0.05);吸光度值为0.8时HLIF蛋白相对表达量显著高于吸光度值为0.5、0.6时(P＜0.05),吸光度值为1.0时与吸光度值为0.8时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).不同温度诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=18.053,P＜0.05),25℃时HLIF蛋白相对表达量显著高于20、30、37、42℃时(P＜0.05).不同浓度诱导剂诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(F=1.181,P＞0.05).不同浓度乙酸诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=27.181,P＜0.05),乙酸浓度为0.00 mmol·L-1时HLIF蛋白相对表达量显著高于乙酸浓度为0.1、0.2、0.3、0.4mmol·L-1时(P＜0.05).结论 成功在大肠杆菌表达了HLIF,并探索出了适合最佳表达的诱导时间、大肠杆菌浓度、诱导温度、诱导剂浓度、乙酸浓度等条件.