肾小管上皮细胞中可溶性表氧化物水解酶对小鼠巨噬细胞极化的调控作用

摘要

目的 探讨肾小管上皮细胞中可溶性表氧化物水解酶(sEH)在小鼠巨噬细胞极化中的作用.方法 以人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞及小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象.将HK-2细胞分为正常对照组、sEH抑制剂组、尿蛋白组及sEH抑制剂联合尿蛋白组;正常对照组细胞不给予任何干预处理;sEH抑制剂组细胞给予1 μmol·L-1 sEH抑制剂;尿蛋白组细胞给予10 g·L-1尿蛋白;sEH抑制剂联合尿蛋白组细胞给予10g· L-1尿蛋白和1 μmol·L-1 sEH抑制剂;各组细胞均培养24 h.将RAW264.7细胞分为A、B、C、D组及干扰素-γ(IFN-γy)阳性对照组、白细胞介素(IL)-4阳性对照组.A、B、C、D组细胞分别加入正常对照组、sEH抑制剂组、尿蛋白组、sEH抑制剂联合尿蛋白组培养24h的HK-2细胞培养基孵育24h;IFN-γ阳性对照组和IL-4阳性对照组细胞分别加入M1型巨噬细胞诱导剂IFN-γ及M2型巨噬细胞诱导剂IL-4.采用Western blot法检测HK-2细胞中sEH蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测HK-2细胞中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-6、集落刺激因子-1(CSF-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达及RAW264.7细胞中诱导型氮氧化物合酶(iNOS)、IL-6、精氨酸酶-1(Arg-1)及IL-10 mRNA表达.酶联免疫吸附试验检测各组HK-2细胞培养上清液中14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-EET)和14,15-脱氧二十碳三烯酸(14,15-DHET)水平,计算14,15-EET/14,15-DHET比值.结果 正常对照组和sEH抑制剂组HK-2细胞中sEH蛋白表达及MCP-1、IL-6、CSF-1、TNF-α mRNA表达、细胞培养上清液中14,15-EET/14,15-DHET比较差异均无统计学意义(P＞0.05).与正常对照组比较,蛋白尿组HK-2细胞中sEH蛋白及MCP-1、IL-6、CSF-1、TNF-α mRNA表达均显著增加(P＜0.05),细胞培养上清液中14,15-EET/14,15-DHET显著降低(P＜0.05).与尿蛋白组比较,sEH抑制剂联合尿蛋白组HK-2细胞中MCP-1、IL-6、CSF-1及TNF-α mRNA表达显著下降(P＜0.05),培养上清液中14,15-EET/14,15-DHET显著升高(P＜0.05).sEH抑制剂联合尿蛋白组与尿蛋白组HK-2细胞中sEH蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).A组与B组RAW264.7细胞中IL-6、iNOS、Arg-1及IL-10 mRNA表达比较差异均无统计学意义(P＞0.05).与A组比较,C组、IFN-γ阳性对照组RAW264.7细胞中iNOS、IL6 mRNA表达显著增加(P ＜0.05,P ＜0.01);IL-4阳性对照组RAW264.7细胞中Arg-1、IL-10 mRNA表达显著增加(P＜0.05).与C组比较,D组RAW264.7细胞中iNOS、IL-6 mRNA表达显著降低(P＜0.05),Arg-1、IL-10 mRNA表达显著增加(P＜0.05).结论 肾小管上皮细胞中的sEH可上调诱导M1型巨噬细胞极化的细胞因子表达.