抗人γ-精浆蛋白VH单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析

摘要

目的扩增出抗人γ-精浆蛋白(γ-Sm)单克隆抗体(mAb)的重链可变区(VH)单域抗体基因，并进行原核表达及空间构象分析。方法从分泌抗γ-Sm mAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA，经RT-PCR扩增VH单域抗体基因，将其克隆到融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中进行表达，并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果VH单域抗体基因全长363 bp，含起始码和终止码。将其克隆到pGEX-4t-1内，转化大肠杆菌DH5α，获得高效表达，表达量占全菌总蛋白质的38％，以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后，用谷胱甘肽(GST)亲和色谱纯化，再经凝血酶水解获得抗γ-SmVH单域抗体。竞争结合抑制实验证明，该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示，该抗体具有完整的抗原结合位点。结论构建成功抗γ-Sm的VH单域抗体，为进一步临床应用奠定基础。