宫颈癌细胞培养上清液诱导THP-1巨噬细胞M2表型

摘要

目的:研究宫颈癌细胞培养上清液诱导并维持THP-1巨噬细胞M2表型的作用。方法:培养宫颈癌细胞系HeLa细胞至第3天,收集细胞培养上清液用以检测肿瘤相关细胞因子(IL-4、IL-6及IL-10)及生长因子(ANG-2、HGF、VEGF)分泌情况。将培养至对数生长期的巨噬细胞分为空白对照组(Mθ组)、M2细胞诱导组(M2组)以及HeLa细胞培养上清液处理组(Mθ+sHeLa组)。其中M2组予以20 ng/mL IL-4、20 ng/mL IL-10处理使其向M2细胞极化,Mθ+sHeLa组加入50%HeLa细胞培养上清液处理培养3 d。随后,利用流式细胞术检测各组细胞表面HLA-DR、CD163、CD206的变化;同时,收集细胞培养上清液并检测其中相关细胞因子、生长因子及TGF-β3的含量。最后,采用流式细胞术及Western blot检测巨噬细胞中JAK-STAT6信号通路的变化。结果:HeLa细胞培养上清液中IL-6、HGF、VEGF含量较多。经过HeLa细胞培养上清液处理后的巨噬细胞表面CD163和CD206含量升高(P<0.05)。相较于Mθ组,M2组及Mθ+sHeLa组的巨噬细胞培养上清液中的相关细胞因子(IL-4、IL-6及IL-10)、生长因子(ANG-2、HGF、VEGF)及TGF-β3含量升高(P<0.05)。去除HeLa细胞培养上清液后48 h后,相较于Mθ组,Mθ+sHeLa组分泌相关细胞因子、生长因子及TGF-β3含量升高(P<0.05)。流式细胞术及Western blot结果显示,与Mθ组比,Mθ+sHeLa组的pSTAT6水平升高(P<0.05)。结论:HeLa细胞培养上清液可通过激活JAK-STAT6信号通路诱导的THP-1巨噬细胞向M2表型的极化促进肿瘤的生长和血管生成。