金黄色葡萄球菌双组份调节系统SaeRS对重要毒力基因的分子调控机制

摘要

目的：初步研究金黄色葡萄球菌双组份调节系统Sae RS对重要毒力基因的分子调控机制。方法：PCR扩增双组份调节系统Sae RS的反应调节蛋白Sae R基因,构建重组表达质粒pET28a-sae R,用限制性酶切、PCR和基因测序方法进行鉴定。用IPTG诱导表达重组蛋白His Sae R,用镍离子螯合亲和层析法纯化,用Western blot法鉴定。用实时荧光定量RT-PCR方法检测金黄色葡萄球菌SA75及SA75Δsae RS突变株luk-PV、hla、coa、fnb B、sak、psmβ基因转录水平。凝胶迁移阻滞实验验证纯化蛋白His Sae R对这些毒力基因启动区序列的结合能力。结果：重组表达质粒p ET28a-sae R构建成功;在0.4 mmol/L IPTG,25℃培养12 h的条件下,重组蛋白His Sae R在大肠杆菌中以可溶形式高效表达;与SA75野生株相比,Dsae RS突变株luk-PV、hla、coa、fnb B基因转录水平均明显下降,分别为野生株的19.7%、0.3%、31.6%、3.5%;psmβ基因和sak基因转录水平无变化。反应调节蛋白Sae R能有效结合luk-PV、hla、coa、fnb B及其自身P1启动区序列。结论：金黄色葡萄球菌双组份调节系统Sae RS对luk-PV、hla、coa、fnb B基因表达具有正调控作用,而这种作用可能是通过反应调节蛋白Sae R与这些基因启动区序列直接结合而实现。