肝癌标志物受体酪氨酸激酶AXL、软骨寡聚基质蛋白和骨桥蛋白多重检测试剂开发与验证

摘要

目的:基于流式荧光技术开发血清中肝癌标志物受体酪氨酸激酶AXL、软骨寡聚基质蛋白(COMP)和骨桥蛋白(OPN)的多重检测试剂。方法:建立检测血清甲胎蛋白(AFP)、AXL、COMP和OPN的流式荧光免疫法,并进行检测性能分析,筛选两个队列的肝癌血清样本进行临床验证并初步探讨四项标志物对肝癌的诊断价值。结果:AFP、AXL、COMP和OPN的检测范围依次为0.046~100.000、0.014~30.000、0.007~15.000、0.023~50.000 ng/mL,最低检测限依次为0.010、0.014、0.004、0.007 ng/mL,批内精密度<8%,批间精密度<5%,回收率为84%~101%,线性度为95%~102%。AXL、COMP和OPN之间没有观察到交叉反应。流式荧光免疫法与临床化学发光免疫法具有显著相关性(r=0.995,P<0.001)。肝癌血清AFP、AXL、COMP和OPN水平均高于健康对照,差异有统计学意义(P<0.01)。针对所有血清样本(n=100),绘制肝癌与健康对照的受试者工作特征(ROC)曲线,血清OPN的曲线下面积(AUC)为0.913,在单项标志物中,OPN对肝癌的诊断效果最佳;AFP、AXL和OPN组合的AUC为0.937,AFP、AXL、COMP和OPN组合的AUC为0.940。结论:本研究建立了四项肝癌血清标志物联合检测方法。AXL、COMP和OPN是诊断肝癌的潜在血清标志物,AXL、OPN与AFP联合检测的肝癌预测模型展示出较好的检测性能。结果对进一步开发其他标志物的多重检测试剂具有重要的参考价值。