E20通过上调Sirt1介导顺铂损伤人卵巢颗粒细胞的保护作用

摘要

目的:研究新型螺杂环查尔酮衍生物E20对顺铂(CDDP)所致人卵巢颗粒细胞(KGN)损伤的保护作用及其分子机制。方法:体外培养KGN细胞系中加入不同浓度E20后通过MTT法筛选出E20的安全浓度;选择浓度为5μg/mL的CDDP单独作用或与不同浓度的E20联合作用KGN细胞,MTT法检测细胞活力的变化;选择不同浓度的CDDP单独作用或与E20联合作用卵巢癌细胞ES-2,MTT法检测细胞活力并计算出半数抑制率(IC50);倒置显微镜观察不同处理后KGN细胞形态变化;流式细胞术测定KGN细胞凋亡变化;ELISA法测定KGN细胞上清液中雌二醇(E2)水平变化;蛋白质印迹(Western blot)法检测KGN细胞Sirt1和凋亡分子Bax、Bcl-2蛋白表达变化;Sirt1-siRNA转染KGN细胞后用Western blot法验证沉默效果,并用MTT法检测Sirt1下调后E20对KGN细胞活力的影响。结果:E20对KGN细胞的安全浓度在20μmol/L以下;CDDP能使KGN细胞和ES-2细胞活力下降,E20能减轻CDDP对KGN细胞的损伤且不会降低CDDP对ES-2细胞的抗增殖能力。CDDP能使KGN细胞形态改变、细胞凋亡增加(P<0.05),而经E20处理后KGN细胞形态恢复正常、细胞凋亡减少(P<0.05)。经CDDP刺激后,KGN细胞的Sirt1、Bcl-2蛋白表达量明显减少(P<0.05),Bax蛋白表达量明显增加(P<0.05),而E20处理可显著上调细胞中的Sirt1、Bcl-2蛋白表达(P<0.05),下调Bax蛋白表达(P<0.05)。与NC-siRNA组相比,Sirt1-siRNA转染后细胞Sirt1蛋白表达量明显减少(P<0.05),且与Control组相比,沉默Sirt1表达后,E20对细胞的保护活性几乎消失。结论:查尔酮衍生物E20可以很好地改善CDDP损伤KGN细胞的活力、形态,提高抗凋亡能力,其可能通过激活Sirt1途径的机制起保护作用。