14-3-3γ表达载体的构建及其对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的:构建一种稳定、高表达的14-3-3γ基因真核表达质粒载体,并探索其抗子宫肌瘤的作用。方法:提取子宫肌瘤细胞总RNA,反转录后通过RT-PCR扩增14-3-3γ,并将扩增的目的基因片段插入pCMVN-Flag真核表达质粒,构建重组质粒14-3-3γ-pCMV-N-Flag,重组体经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术导入子宫肌瘤细胞。应用Western Blot法检测14-3-3γ蛋白的表达,应用CCK-8检测细胞增殖变化,应用Annexin V-FITC/PI双染色法经流式细胞术检测细胞凋亡。结果:①构建的14-3-3γ-pCMV-N-Flag真核表达载体经酶切后电泳和DNA测序,显示载体构建正确;②子宫肌瘤细胞转染重组体后的14-3-3γ表达明显高于转染前(P<0.05);③子宫肌瘤细胞转染重组体后,细胞增殖抑制率为52.90%(P<0.05);④转染重组体后肌瘤细胞的凋亡率明显高于转染前(P<0.05)。结论:本研究成功构建14-3-3γ-pCMV-N-Flag真核表达质粒载体,14-3-3γ在子宫肌瘤细胞内高表达后可抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡。