烟草过氧化物酶Ⅰ的分离纯化及部分光谱特性研究

摘要

烟草过氧化物酶同工酶Ⅰ(TOP Ⅰ)的分离纯化过程,主要包括匀浆、超声破碎、过滤、(NH4)2SO4分级沉淀、DE-52纤维素阴离子交换层析、Sephadex G-75凝胶层析、DEAE-Sephadex A-50阴离子交换层析.经纯化的TOP Ⅰ,纯化酶的比活力为4 826U/mg,在SDS-PAGE上显示出一条蛋白带,分子量在21000左右,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测得TOP Ⅰ分子量为21 888.5,等电点pI为3.5;光谱学分析揭示,在402 nm处有一典型的Soret带,在498 nm和636 nm处有特征吸收峰,表明TOP Ⅰ为一含血红素的酸性蛋白酶.酸度对TOPI的在紫外可见区的特征吸收峰及荧光光谱均产生一定的影响,反映了TOP Ⅰ分子独特的光谱学特性.