改良SDS法提取书虱总RNA的效果评估

摘要

目的建立有效的提取书虱总RNA的方法。方法分别采取改良SDS法、传统SDS法和TRIzol法提取书虱总RNA;采用1%琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性;核酸蛋白分析仪测定RNA纯度和浓度,纯度以A260/A280、A260/A230表示,通过浓度推算产率;以β-actin为目的基因,RT-PCR法初步评价RNA提取效果。同时,用改良SDS法探究不同数量的书虱总RNA提取效果。结果改良SDS法产率最高。经方差分析,3种方法的浓度差异具有统计学意义(F=17.874,P<0.001),经SNK法每组互比,改良SDS法浓度较高,其次为TRIzol法,传统SDS法较低。TRIzol法未见28s条带;传统SDS法有gDNA污染;而改良SDS法电泳结果显示28s、18s条带完整清晰,条带之间无明显弥散现象,说明提取的RNA完整性较高。3种方法提取的RNA经RT-PCR均能扩增出阳性条带。30只书虱即可获得高质量RNA,满足后续实验要求。结论改良SDS法操作简单、成本低、耗时少,适于书虱总RNA的提取。