MiR-185-5p靶向调控REG1A表达对膀胱肿瘤发生和侵袭的影响

摘要

目的探讨REG1A基因和微小RNA miRNA-185-5p对膀胱癌细胞增殖、侵袭、血管形成和上皮间充质转化的影响,并探讨其可能存在的分子调控机制。方法应用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测膀胱癌细胞系中REG1A和miR-185-5p的mRNA表达水平,应用免疫组化技术检测24对膀胱癌临床样本中REG1A的蛋白表达水平。应用荧光素酶报告基因验证miR-185-5p和REG1A的特异性结合,进一步应用细胞转染技术和qRT-PCR明确miR-185-5p和REG1A的调控关系。应用细胞转染技术分别研究miR-185-5p抑制物(inhibitor)和模拟物(mimic)对膀胱癌T24细胞功能的影响。利用小RNA干扰技术敲低REG1A后进行T24细胞功能回复实验。结果与正常尿路上皮细胞系SV-HUC-1相比,T24、J82和UM-UC-3细胞系中REG1A显著高表达(P<0.05),miR-185-5p显著低表达(P<0.05);与癌旁组织相比,膀胱癌组织中REG1A蛋白显著高表达(P<0.05)。荧光素酶报告基因验证miR-185-5p和REG1A存在特异性结合,qRT-PCR结果表明,细胞转染后miR-185-5p靶向调控REG1A在T24细胞的表达。miR-185-5p mimic和inhibitor能分别抑制和增强T24细胞的增殖、侵袭、血管形成和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),差异有统计学意义(P<0.05)。REG1A-siRNA能减弱miR-185-5p inhibitor对T24细胞的增殖、侵袭、血管形成能力和EMT的促进作用。结论miR-185-5p靶向调控REG1A表达影响膀胱癌的增殖、侵袭、血管形成和EMT发生,miR-185-5p/REG1A调控通路是潜在的膀胱癌治疗靶点。