Drak2在高糖诱导胰岛β细胞凋亡中的作用

摘要

目的探讨Drak2在高糖诱导的胰岛β细胞凋亡中的作用。方法不同浓度葡萄糖诱导刺激,模拟体外胰岛细胞糖毒性损伤后的细胞凋亡模型,通过CCK8检测葡萄糖作用后细胞的存活率;Western印迹法检测不同糖浓度时Drak2的表达情况,完成糖浓度的筛选。构建Drak2-pc DNA3.0质粒,应用基因转染技术构建Drak2过表达可诱导细胞系,Western印迹法分析糖诱导前后胰岛β细胞Drak2的表达。Real-Time PCR测定Drak2、Bax、Bcl-2的mRNA水平,流式细胞法测定诱导前后的凋亡情况。结果 CCK8结果显示,随着培养液中糖浓度上升,Rinm5 m f凋亡逐渐增加,随着时间的增加(24、48、72 h)凋亡也逐渐增加,呈一定的量效关系。W estern印迹法显示在糖浓度22.2 mmol/L培养72 h时,Drak2的表达量最多。构建Drak2过表达,在转染6 h后开始葡萄糖诱导,在高糖诱导72 h时过表达组Drak2蛋白是正常组的6倍。Real-Time PCR显示,过表达组Drak 2 mRNA在葡萄糖诱导前开始增加,在高糖诱导72 h时增高明显(P<0.05),凋亡相关基因BAX、Bcl-2表达均有增加(P<0.05)。流式细胞仪检测显示高糖诱导后,过表达组凋亡率明显高于正常组(P<0.05)。结论 Drak 2过表达促进高糖诱导的胰岛β细胞凋亡。