基于UPLC对卤虫体内类胡萝卜素检测方法的建立

摘要

通过优化梯度洗脱条件和类胡萝卜素提取条件,探索建立基于超高效液相色谱(ultraperformanceliquid chromatography,UPLC)检测卤虫体内类胡萝卜素组成及含量的有效方法.结果表明:类胡萝卜素提取选用丙酮-甲醇(体积比为2:1)作为提取溶剂,在超声波处理30 min、65℃浸提20 min的条件下提取效果最佳.UPLC选用ACQUITYH-ClassBEHC18色谱柱(1.7μm,2.1 mm×150 mm)以及二极管阵列(PDA)检测器.梯度洗脱条件:10%超纯水+90%甲醇-乙腈溶液(体积比为3:7)16 min,20%甲基叔丁基醚+80%甲醇-乙腈溶液(体积比为3:7)14 min,流量0.3 mL/min,进样量10μL,柱温25℃,检测波长475 nm.在此条件下可以在30 min内有效检测出卤虫初孵无节幼体中的角黄素和海胆酮的含量,分别为(572.60±11.60)μg/g和(18.02±0.41)μg/g(以干质量计),且验证了无节幼体体内不含虾青素、玉米黄质和β-胡萝卜素.该方法快速、准确、灵敏、有效,为后续卤虫类胡萝卜素营养强化及类胡萝卜素代谢模型的建立提供了有效的技术手段.