TGF-β诱导及病毒感染获得iTreg细胞的方法学研究

摘要

目的:建立MSC V-Foxp3感染法和TGF-β诱导法获取诱导性调节性T淋巴细胞(iTreg)的方法,并初步探讨两种iTreg的作用机制异同.方法:分别用MSCV-Foxp3感染和TGF-β诱导获取iTreg,流式细胞术和PCR检测两种iTreg的产率和Foxp3mRNA表达,CFSE染色观察iTreg的免疫抑制作用.ELISA检测iTreg的IL-10和TGF-β分泌,PCR检测iTreg颗粒酶A和B的mRNA水平.结果:感染法和诱导法iTreg产率分别可达49.12％和41.08％,但前者Foxp3 mRNA表达高于后者(P＜0.05).两种iTreg均具有一定的免疫抑制活性,IL-10分泌水平较原始CD4+T细胞上升(P＜0.05),但颗粒酶B在诱导组iTreg的表达显著高于感染组(P＜0.05).结论:病毒感染法与TGF-β诱导法均可成功获得具有免疫抑制功能的iTreg,但前者Foxp3mRNA表达高于后者.两种iTreg发挥免疫抑制功能可能都有IL-10参与,而颗粒酶B可能只与诱导组iTreg有关.