羊痘病毒宿主范围基因063缺失表达载体的构建

摘要

为研究羊痘病毒宿主范围基因(Hrg)063的特性及生物学功能,采用overlap PCR技术将绿色荧光蛋白(GFP)基因与063基因两侧的同源臂连接起来,把扩增的目的基因插入到PEASY-T1克隆载体中,构建以GFP基因为报告基因的063基因缺失表达载体,并测序鉴定;用脂质体Lipofectamine 2000转染表达载体到羊痘病毒感染的羊睾丸原代细胞中,挑取荧光显微镜下表达为绿色荧光的063基因缺失的羊痘重组病毒,并传代纯化.成功的构建了Hrg 063缺失的表达载体(PEASY-Δ063-GFP),测序结果表明063基因的上下游同源臂与GFP报告基因大小约900 bp,与理论相符.转染后表达载体与羊痘病毒重组,得到了063基因缺失的山羊病毒SS株、TS株和疫苗株3个毒株重组病毒,但纯化时重组病毒不能正常传代.该研究中063基因缺失表达载体的构建为其生物学特性及功能的研究奠定了基础.