草乌甲素对LPS诱导的RAW264.7细胞抗炎作用及相关机制研究

摘要

目的探究草乌甲素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用及相关机制。方法使用不同浓度的草乌甲素处理RAW264.7细胞24 h,用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)检测RAW264.7细胞活力并筛选草乌甲素对RAW264.7细胞活性的安全剂量范围;使用最大安全剂量的草乌甲素统一预处理RAW264.7细胞2 h,再用LPS刺激细胞,于不同药物作用时间点分别收取上清液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α与巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平;Western blot法检测草乌甲素对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS、COX-2蛋白表达水平及对NF-κB、MAPK信号通路活化的影响。结果草乌甲素在小于150μg/mL时对RAW264.7细胞活力没有显著影响;ELISA结果显示与LPS组相比草乌甲素在各作用时间点均能有效抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6与MCP-1的含量(P<0.05),其中草乌甲素在作用时间分别为30 h、5 h时对TNF-α和IL-1β的抑制作用最明显(P<0.05);WB检测结果表明草乌甲素能显著抑制iNOS、COX-2、TLR4的表达以及NF-κB和MAPK通路的活化(P<0.05),其中草乌甲素作用时间48 h时抑制作用最明显(P<0.05)。结论草乌甲素可能通过抑制TLR4的表达以及NF-κB和MAPK的活化减少炎症因子的释放从而发挥抗炎作用。