紫云英根瘤菌结瘤基因调控片段克隆和分析

摘要

通过对紫云英根瘤菌７６５３Ｒ及其Ｎｏｄ－突变株７６５３Ｒ－１侵染根毛试验证实，７６５３Ｒ菌株３１８×１０３ｂｐ大质粒决定早期结瘤功能，分子杂交结果显示，其ｎｏｄＤＡＢＣ定位于该质粒上．将７６５３Ｒ菌株的大质粒ＤＮＡ进行酶切并克隆到表达载体ｐＭＰ２２０上，构建ｌａｃＺ重组子文库，将ｌａｃＺ重组子文库导入７６５３Ｒ菌株，在加有Ｘ－ｇａｌ和种子浸提物的根瘤菌培养基上选择蓝色菌落．通过Ｍｉｌｅｒ试验测定它们的β－半乳糖苷酶活性，获得１株种子浸提物对其有诱导效应的菌株ＨＮ１８，对该菌株所含的重组质粒ｐＨＮ１８进行ｎｏｄＤＡＢＣ探针杂交，发现有１条１．７×１０３ｂｐ的阳性杂交带。