巨噬细胞移动抑制因子诱导血管生成相关基因的表达

摘要

[目的]研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对人血管内皮细胞表达血管生成相关基因的诱导作用.[方法]通过亚克隆,构建原核表达质粒pET22b-MIF,并转化入工程菌BL21(DE3).用Ni-亲合柱分离纯化BL21(DE3)中经IPTG诱导表达的重组MIF.用巨噬细胞移动抑制试验鉴定复性的重组MIF的活性.分别用0、30、60、120 ng/mL的重组MIF处理人血管内皮细胞12 h,通过Real-time定量PCR检测人血管内皮细胞中VEGF165、FGFR3、MMP9、TGF-α、PDGF-α的mRNA表达.用体外血管生成试验检测重组MIF诱导人血管内皮细胞的成管腔作用.[结果]正确构建了重组质粒pET22b-MIF.经IPTG诱导,在大肠杆菌中以包涵体形式表达出重组MIF.复性的重组MIF对巨噬细胞移动的抑制水平达30%(P＜0.05).重组MIF能特异地诱导HVECs中VEGF165、FGFR3、MMP9、TGF-α、PDGF-α表达,并能特异地诱导人血管内皮细胞形成管腔结构.[结论]在大肠杆菌中成功表达出MIF,MIF能特异地诱导人血管内皮细胞中血管生成相关基因的表达.