重构腺相关病毒转导PDX-1对C2C12分化为胰岛素分泌细胞的作用

摘要

【目的】重构含有PDX-1的腺相关病毒载体,将PDX-1转导入C2C12细胞,观察胰岛素分泌量的改变。【方法】应用PCR方法将PDX-1从pZL1质粒中克隆出来,安装到Stratagene公司的腺相关病毒(AAVHelper-FreeSystem)表达系统中,转染HEK293细胞,培养72h,提取病毒悬液,转导PDX-1进入C2C12细胞中,检测细胞培养液中的胰岛素含量。【结果】①用X-gal染色系统检测,可见有蓝色的阳性细胞。②病毒的粗略的浓度经计算后大约为1012/mL,转导的病毒数约为1011。③PCR结果:用重构的腺相关病毒转导后C2C12有胰岛素及PDX-1的mRNA的表达。④用重构的腺相关病毒转导PDX-1进入C2C12后的培养液的胰岛素浓度为(5.5±1.1)μIU/mL,较其他方法也有较明显的增加(P<0.05)。【结论】通过应用含有PDX-1基因的重构腺相关病毒载体可以转导PDX-1在C2C12细胞中表达,且可以提高C2C12分化为胰岛素分泌细胞的分泌量。