慢病毒介导shRNA静默CXCR4对Eca109细胞转移特性的影响

摘要

【目的】新近研究显示CXCL12/CXCR4通路在食管癌组织中有较高的表达,本研究探讨应用慢病毒介导的RNA干扰技术,有效静默食管癌细胞株Eca109细胞CXCR4的表达,研究CXCL12/CXCR4通路对食管癌Eca109细胞转移能力的影响。【方法】以人CXCR4mRNA编码序列作为干扰靶点,构建靶向CXCR4的vshRNA表达质粒,另构建不针对任何已知mRNA的阴性对照vshRNA表达质粒,转染相应组别细胞。研究分为控制组、阴性对照组及静默组。应用实时定量PCR及Westernblot检测转染后食管癌细胞CXCR4表达的变化。Transwell侵袭小室实验以穿膜细胞的数量评估各组Eca109食管癌细胞的侵袭能力,MTT法观察Eca109各组细胞与Matrigel胶黏附能力的变化,划痕法检测迁移能力改变。【结果】成功构建CXCR4shRNA慢病毒载体CXCR4-RNAi-LV。QPCR及Westernblot结果显示静默组Eca109细胞CXCR4mRNA及蛋白的表达水平较阴性对照组及空白组显著降低(P<0.05)。CXCR4有效静默后,食管癌Eca109细胞黏附、侵袭及迁移能力显著下降(P<0.05)。【结论】慢病毒介导的shRNA能有效地静默食管癌细胞CXCR4基因的表达,阻断CXCL12/CXCR4通路生物学效应,有效抑制食管癌Eca109细胞的转移潜能,提示CXCL12/CXCR4通路在食管鳞癌发展过程中具有重要作用。