FAstV、FPV和FECoV三重PCR检测方法的建立及应用

摘要

猫星状病毒(Feline astrovirus,FAstV)、猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV)、猫肠道冠状病毒(Feline enteric coronavirus,FECoV)是临床上引起猫腹泻的重要病原,为建立一种能同时鉴别三种病原的分子检测方法,通过对引物浓度和退火温度的条件进行优化筛选,建立了FAstV/FPV/FECoV的三重PCR方法,并对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行验证.结果表明,该方法可特异性扩增出FAstV(320 bp)、FPV(468 bp)和FECoV(664 bp)的目的片段,而未扩增出其它犬猫相关病原,且重复性好.FAstV、FPV和FECoV的最低检测限分别为2×10^(7)copy/μL(7.1 pg/μL)、4.7×10^(6)copy/μL(2.4 pg/μL)和7×10^(6)copy/μL(5.1 pg/μL).应用建立的三重PCR方法对2019~2020年成都市区采集的207份猫粪便样本(141份腹泻样本,66份临床健康样本)进行检测,结果显示FPV、FAstV和FECoV的检出率分别为37.20%(77/207)、24.15%(50/207)和15.46%(32/207);混合感染以两种病原混合感染为主,其中,FPV/FAstV、FPV/FECoV和FAstV/FECoV的混合感染率分别为9.18%、6.28%和6.28%,检测结果与单一PCR相符.本研究成功建立了FAstV/FPV/FECoV的三重PCR检测方法,可以用于相关病原的临床检测和流行病学调查.