胰蛋白酶原16对哮喘气道肌成纤维细胞分化的影响

摘要

目的 研究慢性哮喘发展过程中气管壁中肌成纤维细胞的异常分化与胰蛋白酶原16(trypsinogen16,TG16)表达量之间的关系,进一步探索气道基底膜增厚的具体机制.方法 利用SDS-PAGE蛋白电泳分析比较OVA诱导的慢性哮喘小鼠与对照鼠肺总蛋白谱的差异,筛选出差异条带进行质谱分析.对差异条带中的TG16基因从小鼠肺组织中进行克隆和表达,转染体外培养的小鼠胚胎成纤维细胞同时给予转化生长因子-1(TGF-β1)刺激,RT-PCR分析过表达TG16对细胞机动蛋白α亚型(α-actin)的mRNA水平影响.给予TG16的RNA干扰,利用Western blotting检测TG16的下降对α-actin的表达水平的影响.结果 OVA慢性致敏小鼠的肺组织蛋白TG16含量明显增高;在TGF-β1刺激下,与对照组(α-actin/GAPDH=3.20±1.36)相比,3T3细胞外源表达TG16会明显抑制α-actin的表达(1.78±0.50);同样在TGF-β1刺激下,与转染对照寡核苷酸的3T3细胞(2.78±0.50)相比,应用RNAi干扰抑制TG16表达的同时α-actin的表达显著上调(3.60±0.44).结论 首次发现和证实TG16可以抑制α-actin在成纤维细胞中的表达,这可能是哮喘发展过程中机体本身的一种保护性反应.