六味酸枣汤治疗围绝经期失眠的作用机制:基于网络药理学与动物实验

摘要

目的基于网络药理学探索六味酸枣汤治疗围绝经期失眠的作用机制,并运用分子对接和动物实验进行验证。方法借助TCMSP和Batman-TCM数据库检索六味酸枣汤的活性成分和作用靶点,并构建“中药-活性成分-靶点”网络。以“Perimenopausal Insomnia”为关键词在OMIM、Genecards和Gene数据库获取疾病靶点。将共同靶点导入STRING数据库和Cytoscape软件筛选核心治疗靶点,借助DAVID数据库进行GO富集分析和KEGG通路分析。利用AutoDock对六味酸枣汤主要活性成分与核心靶点进行分子对接实验,同时以动物实验验证结果。取48只大鼠随机分为假手术组(8只)和造模组(40只),采用双侧卵巢切除术和对氯苯丙氨酸腹腔注射建立PI模型。将造模组大鼠随机分为模型组、阳性对照组和中药低、中、高剂量组,分别予以生理盐水10 mL/kg、唑吡坦10 mg/kg以及六味酸枣汤9.0、18.0、36.0 g/kg灌胃,连续8 d。末次给药后进行戊巴比妥钠协同的翻正反射实验,记录各组睡眠潜伏期和睡眠时长,ELISA法测定血清雌激素、卵泡刺激素、黄体生成素等激素水平,WB和PCR法分别检测下丘脑组织中ESR1与SIRT1的蛋白及mRNA水平。结果共筛选出六味酸枣汤活性成分99个,药物靶点389个,PI相关靶点187个,药物与PI共同靶点15个;核心活性成分主要为亚美异粟碱、酸枣仁环肽、白桦脂酸等,核心靶点包括ESR1、SIRT1、SERPINE1、COMT和CCL2等。GO分析结果主要包括RNA聚合酶II启动子对转录的正向调节、对药物的反应和转录的正向调节等生物学过程;KEGG富集通路包括多巴胺能突触途径和酪氨酸、色氨酸代谢等。分子对接结果显示六味酸枣汤主要活性成分与ESR1、SIRT1和SERPINE1有较好的结合能,与酒石酸唑吡坦相当。动物实验表明,六味酸枣汤可有效改善大鼠失眠症状(P<0.01),调节雌激素等HPO轴相关激素水平(P<0.05),促进ESR1和SIRT1的蛋白与mRNA表达(P<0.01)。结论六味酸枣汤可能通过亚美异粟碱、酸枣仁环肽、白桦脂酸等多种活性成分协同调控ESR1、SIRT1和SERPINE1等基因表达,进而达到治疗围绝经期失眠的效果。