安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白的原核表达及其免疫原性研究

摘要

【目的】验证安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白（COWP）的免疫原性,为建立安氏隐孢子虫病免疫学诊断方法奠定基础。【方法】根据Gen Bank已公布的安氏隐孢子虫COWP同源基因序列（DQ060431）设计引物,克隆COWP基因并构建原核表达载体,经IPTG诱导表达后,采用蛋白印迹法检测其免疫原性。【结果】扩增获得的COWP基因片段为549bp,其序列与Gen Bank已公布COWP同源基因序列（DQ060431）的同源性达100%,将其插入p ET-32a载体可构建p ET-32a-COWP表达载体。重组菌在30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导5 h后,其表达形式以可溶性表达为主;NTA-Ni亲和层析柱层析时用200 mmol/L咪唑洗脱液洗脱,即能得到纯化的重组蛋白,重组蛋白分子量约40 k Da。以抗His标签鼠单克隆抗体或鼠抗安氏隐孢子虫高免血清为一抗进行Western blotting检测,均能获得预期的目的条带。【结论】重组COWP蛋白具有良好的免疫原性,可作为安氏隐孢子虫病免疫学诊断的候选抗原。