水牛波形蛋白基因克隆及其表达分析

摘要

【目的】克隆水牛波形蛋白（VIM）基因,并明确VIM基因在水牛成熟卵母细胞（MII期）和早期胚胎（2-细胞阶段）中的表达情况,为研究VIM在卵母细胞成熟及附植前胚胎发育中的作用机理打下基础。【方法】根据GenBank上已公布的水牛VIM基因mRNA序列设计引物,采用RT-PCR克隆水牛VIM基因,利用在线软件程序对克隆获得的水牛VIM基因进行生物信息学分析,同时以细胞免疫荧光试验检测VIM在水牛成熟卵母细胞（MII期）及早期胚胎（2-细胞阶段）中的表达情况。【结果】水牛VIM基因长度为1469 bp,其编码区长度1401 bp,编码466个氨基酸。水牛VIM基因序列与人类、黑猩猩、食蟹猴、家犬、马和牛的VIM基因序列具有高度的同源性,分别为93%、93%、93%、94%、94%和99%;基于VIM基因序列构建的系统发育进化树也显示水牛与牛的亲缘关系最近。水牛VIM的分子量为53.73 kD,理论等电点（pI）5.05,主要在线粒体中表达,稳定性差（不稳定系数53.65）,具有较强的亲水性,无跨膜结构,不属于分泌型蛋白,其蛋白结构以α-螺旋为主。VIM在水牛成熟卵母细胞（MⅡ期）及早期胚胎（2-细胞阶段）中均有表达,且在成熟卵母细胞中的表达量明显高于早期胚胎。【结论】水牛VIM基因编码序列具有较高的保守性,且在水牛成熟卵母细胞（MⅡ期）中的表达量明显高于早期胚胎（2-细胞阶段）。