脱毛碱性蛋白酶(DHAP)的饱和突变

摘要

本实验在同源建模和氨基酸序列比对的基础上,选取脱毛碱性蛋白酶(DHAP)8个氨基酸位点进行饱和突变.通过牛奶平板和96孔板发酵筛选,获得了4个催化特性改良的突变体,测序鉴定为D248F,D248S,M233L和W214K.利用酪蛋白和合成肽(AAPL-pN)作为底物,对这些突变体进行了评价,结果表明D248F、D248S、W214K在常温(28℃)下的酪蛋白水解活性提高;M233L在常温、高温(50℃)的酶活以及热稳定性都有增加.同时,M233L和W214K在25℃和50℃水解AAPL-pN的酶活也分别得到了不同程度的提高.