携反义m rp和m dr1双耐药基因的重组腺相关病毒载体的构建与鉴定

摘要

目的构建携带反义多药耐药相关蛋白基因(m rp)和反义多药耐药基因(m dr1)双耐药基因的重组腺相关病毒载体,以用于逆转肝细胞癌(HCC)多药耐药(M DR)的研究。方法将m rp基因cDNA 5′端500 bp的基因片段与m dr1基因cDNA 5′端600 bp的基因片段,用基因片段重叠法连接成为新的基因片段(m rp+m dr1),并反向克隆到重组腺相关病毒载体系统(AAV H e lper-F ree System)表达质粒pAAV-IRES-hrGFP的多克隆位点,构建出重组表达质粒pAAV-IRES-hrGFP-(m rp+m dr1)AS;再将pAAV-IRES-hrGFP-(m rp+m dr1)AS与AAV H e lper-F ree System中的控制质粒pAAV-RC和辅助质粒pH e lper用脂质体转染法共转染293细胞,生成新型重组腺相关病毒载体rAAV 2-(m rp+m dr1)AS。结果成功构建并包装出新型重组腺相关病毒载体rAAV 2-(m rp+m dr1)AS,病毒滴度达2.5×108efu/m l。结论构建的rAAV 2-(m rp+m dr1)AS可望能将反义m rp和m dr1基因片段导入HCC耐药细胞株。