鸭疱疹病毒1型实时荧光定量PCR方法的建立

摘要

目的 建立检测鸭疱疹病毒1型（鸭瘟病毒）的实时荧光定量PCR方法，为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法 根据病毒DNA聚合酶基因的序列，设计引物和探针，采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR，用含有125bp扩增产物的pMD18-T载体质粒为阳性对照，构建标准曲线，对该方法的特异性、可重复性、敏感性进行评价，同时与传统PCR方法进行比较研究。结果 标准曲线表明在2．3×10^5～2．3×10拷贝数之间有很好的线性关系（r=0．999）；实时荧光定量PCR最少可检测到23个阳性质粒，说明有很好的敏感性；试验内及试验间变异系数分别为1．22～6．69以及2．09～8．84，说明有较好的重复性；对非鸭瘟病毒DNA无扩增，说明有很好的特异性；在对病毒DNA的检测方面，比传统PCR的敏感性高出10^4倍。结论 成功建立了针对鸭瘟病毒的特异、敏感、重复性强且可准确定量的实时荧光定量PCR方法。