恒河猴(Macaca mulatta)肝脏cDNA文库的构建

摘要

目的构建正常恒河猴的肝脏组织cDNA表达文库,以筛选恒河猴的相关基因并提供其作为医学研究动物模型的遗传学依据。方法提取正常恒河猴肝脏组织总RNA,纯化的mRNA反转录合成cDNA,连接EcoR接头,经Xho酶切并用CHROMA SPIN-400分离cDNA,将大于500bp的cDNA片段连接于λZAP表达载体,体外包装后转染至XL1-BlueMRF’宿主菌中,再扩增文库。对cDNA文库的滴度、重组率和插入片段的大小进行检测。结果初始文库的库容量为1.2×106pfu,初始文库和扩增文库的滴度分别为1.1×106pfu/mL、7.7×109pfu/mL,重组率分别为99.3%、98.2%,插入片段平均长度分别为2.0kb、2.3kb。结论成功构建了恒河猴肝脏组织的cDNA表达文库,为同种和异种移植以及移植相关药物临床前研究奠定了良好的基础。