Neuritin真核表达载体的构建及鉴定

摘要

Neuritin(CPG15)是一种神经营养因子,能促进神经突起生长,为了探讨Neuritin可能的作用机制,本研究构建了人类neuritin基因的真核表达载体。采用PCR技术扩增编码人neuritin基因cDNA全长序列,并纯化回收,酶切、连接入真核表达载体pcDNA3.1(-)A中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆pcDNA3.1(-)A-neuritin扩增后,提取质粒,进行双酶切鉴定以及DNA测序鉴定。结果显示,构建的重组质粒pcDNA3.1(-)A-neuritin含有450bp neuritin片段,且重组质粒所含的neuritin读框片段与GenBank NM 016588.2序列同源性100%。由此可知:成功构建了pcDNA3.1(-)A-neuritin真核表达载体,为进一步研究该基因的功能及作用机制奠定良好的实验基础。