两种MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊细粒棘球六钩蚴侵染期小肠消减文库的构建

摘要

为了分离两种MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊个体在细粒棘球六钩蚴侵染期小肠组织的差异表达基因,试验在实验室前期采用PCR-RFLP方法筛选获得这两种MHC-DRB1单倍型(包虫病抗性相关的MHC-DRB1MvaIbc-SacIIab-Hin1Iab单倍型和包虫病非抗性相关的MHC-DRB1 MvaIbb-SacIIaa-Hin1Iaa单倍型)的基础上,采用抑制性消减杂交技术构建了以非抗性相关哈萨克绵羊六钩蚴侵染期小肠cDNA为实验方(Tester),抗性相关哈萨克绵羊六钩蚴侵染期小肠cDNA为消减方(Driver)的消减文库。结果显示:以内参基因GAPDH为指标,检测文库的消减效率为215倍;从文库中随机挑选98个阳性克隆进行了PCR检测,显示插入片段的大小分布于150～1000bp。结论:消减文库的构建成功,为进一步分离和鉴定相关的差异表达基因,探讨包虫病抗性相关MHC-DRB1单倍型哈萨克绵羊抵抗六钩蚴侵染的分子作用机制奠定了研究基础。