Neuritin siRNA表达载体的构建及对细胞中Neuritin表达的影响

摘要

为构建neuritin siRNA干扰载体并观察对细胞中neuritin表达水平的影响。采用化学合成法获取靶向neu-ritin的短发夹寡核苷酸序列,与线性化pGPU6/Neo质粒退火连接。转化后获取的neuritin siRNA经酶切及测序鉴定正确后,转染293T细胞。Western-Blot和间接免疫荧光分析观察构建的neuritin siRNA载体对细胞中neu-ritin表达及其定位的影响。neuritin siRNA干扰载体经酶切及测序分析的结果显示,目的核苷酸序列成功插入了预计位点且序列完全正确。neuritin siRNA干扰载体转染293T细胞后,Western-Blot检测显示,neuritin siRNA干扰载体明显降低了细胞中neuritin基因的蛋白表达;间接免疫荧光结果显示,4种neuritin siRNA明显减弱了定位于细胞膜上的neuritin蛋白的荧光强度(其中neuritin siRNA4的抑制效果最为明显)。由此可知,neuritin siRNA干扰载体成功构建,且能明显抑制细胞中neuritin的表达。