Kozak序列对nNOS基因表达及神经细胞分化的影响

摘要

为探讨Kozak调控序列对nNOS(neuronal nitric oxide synthase,神经型一氧化氮合酶)基因表达的影响,并验证其在神经细胞分化过程中的作用。构建了含有经典Kozak序列调控元件及野生型前导序列的人源nNOS表达载体;通过qPCR和western blot技术检测不同表达载体在SH-SY5Y细胞中的转录水平和翻译效率;利用SH-SY5Y神经细胞的诱导分化模型进一步验证不同的nNOS表达调控序列对于神经细胞分化的影响;通过测量和定量神经突起长度,结合q PCR法定量神经细胞分化关键标志物Tau和MAP2的表达来表征神经细胞分化程度。结果显示,经典Kozak调控元件(-3位A和G)和野生型前导序列(含-3位A)都能显著提高nNOS载体的表达效率,其中,野生型序列效率更高,但Kozak元件和野生型序列均不影响nNOS转录。在SH-SY5Y神经细胞分化模型中,Kozak元件也能促进分化进程,野生型序列的促分化作用最强。由此可知,通过对比不同调控序列,获得了以野生型序列引导的nNOS高效表达载体。Kozak元件对不同基因的调节效果差异较大,针对特定基因,有必要通过详细的对比实验确认最佳调控序列。