含内蛋白子融合表达载体的构建与人神经营养因子-3的初步表达

摘要

为了构建一个含蛋白质剪接元件的表达载体,将3.38 kb的pExSec Ⅰ的多克隆位点(EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ)处插入一个含多个酶切位点的49 bp寡聚核苷酸.然后将pMYB129中intein-CBD基因片段移插入上述经改造的pExSec I中,构建成含内蛋白子的表达载体pExIC.根据人神经营养因子-3(hNT-3)的已知DNA序列,设计含Nde I/Xho I酶切位点的引物,用PCR法从人全血总DNA中扩增hNT-3,再插入pExIC载体中,构建成pExIC-hNT-3重组质粒.经转化后,工程菌E.coli BL21(DE3)/pExIC-hNT-3在LB培养基中获得融合表达,根据intein的自剪切原理,在还原剂DTT作用下,初步获得了约14 kD的hNT-3目的蛋白.