微小RNA-8085在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌J82细胞侵袭和增殖的影响

摘要

目的 分析微小RNA-8085(miR-8085)在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌J82细胞侵袭和增殖的影响,并探究其分子机制. 方法 实时定量PCR(qPCR)检测32例膀胱癌和癌旁组织中miR-8085的表达水平.以携带miR-8085的慢病毒或阴性对照慢病毒感染J82细胞,命名为实验组和对照组,qPCR检测转染效率.Transwell侵袭实验和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测感染后J82细胞的侵袭能力和增殖能力.生物信息学方法预测miR-8085可能的靶基因.双荧光素酶报告基因实验验证miR-8085与靶基因mRNA的结合.qPCR和Western blot检测感染后J82细胞中靶基因在mRNA和蛋白水平的表达量. 结果 膀胱癌组织和癌旁组织中miR4085的表达量分别为2.50±0.78和7.35±0.92(P＜0.01).与对照组相比,实验组J82细胞中miR-8085的表达量显著增加(P＜0.01).对照组和实验组中J82穿膜细胞数分别为82.63±7.60和35.45±11.27,实验组J82细胞的侵袭能力显著被抑制(P＜0.05).实验组J82细胞的增殖能力从第3天开始显著被抑制(P＜0.05).生物信息学方法显示,miR-8085可能的靶基因是拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A).双荧光素酶报告基因实验显示,miR-8085可与TOP2A mRNA 3'非翻译区靶向结合.实验组J82细胞株中TOP2A基因在mRNA和蛋白水平的表达量均显著减少(P＜0.01).结论 miR-8085在膀胱癌中表达明显降低,过表达miR-8085可通过干扰TOP2A基因的表达,抑制膀胱癌J82细胞的侵袭和增殖能力,可能成为膀胱癌治疗的潜在靶点.