高表达SEL1L减轻血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞肥大的机制

摘要

目的 观察高表达Lin-12样抑制子/增强子(SEL1L)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)所致心肌细胞肥大的影响并探究其分子机制。方法 原代新生小鼠心肌细胞分为4组:对照组(Con)、AngⅡ组、AngⅡ+SEL1L高表达组(AngⅡ+SEL1L)和AngⅡ+G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)高表达+SEL1L高表达组(AngⅡ+GRK2+SEL1L)。AngⅡ组、AngⅡ+SEL1L组和AngⅡ+GRK2+SEL1L组用含AngⅡ(1μmol/L)的DMEM培养基培养48 h以诱导心肌细胞肥大。AngⅡ+SEL1L组和AngⅡ+GRK2+SEL1L组采用腺病毒转染法高表达心肌细胞内SEL1L和GRK2分子后再用AngⅡ诱导心肌细胞肥大。qRT-PCR法检测SEL1L、GRK2和心肌肥厚相关分子(ANP、BNP、α-MHC和β-MHC)mRNA的表达,免疫荧光染色法评估心肌细胞平均横截面积,TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡率,特定试剂盒检测心肌细胞线粒体功能,DHE染色检测心肌细胞ROS的生成,Western blotting法检测SEL1L、GRK2和内质网应激相关分子(PERK、CHOP和GPR78)的蛋白表达。结果 与Con组相比,AngⅡ组心肌细胞SEL1L分子表达显著降低,GRK2分子表达明显升高(均P<0.01);心肌肥厚基因(ANP、BNP和β-MHC)表达明显上调,细胞表面积明显增大,细胞凋亡率显著增加(均P<0.01);并且心肌细胞内质网应激及氧化应激水平明显上升,线粒体功能显著受损(均P<0.01)。与AngⅡ组相比,AngⅡ+SEL1L组心肌细胞SEL1L分子表达显著升高,GRK2分子表达明显降低(均P<0.01);心肌肥厚基因表达明显下调,细胞表面积明显缩小,细胞凋亡率显著减低(均P<0.01);并且心肌细胞内质网应激及氧化应激水平明显下降,线粒体功能显著恢复(均P<0.01)。与AngⅡ+SEL1L组相比,AngII+GRK2+SEL1L组心肌细胞SEL1L分子表达无明显改变,但GRK2分子表达明显上升(P<0.01);心肌肥厚基因表达明显增加,细胞表面积明显变大,细胞凋亡率显著增加(均P<0.01);并且心肌细胞内质网应激及氧化应激水平明显上调,线粒体功能显著受损(均P<0.01)。结论 高表达SEL1L可能是通过抑制GRK2的表达,减轻心肌细胞内质网应激和氧化应激损伤,进而发挥抗血管紧张素Ⅱ所致心肌细胞肥大的保护作用。