重组复制缺陷型腺病毒AdIL-10构建及其在HSC中的表达

摘要

目的利用AdEasy系统构建重组复制缺陷型腺病毒AdIL 10 ,并观察其在肝星状细胞 (HSC)中的表达。方法从SD大鼠脾脏单核细胞中抽提总RNA ,通过RT PCR获得鼠IL 10cDNA片段 ,插入穿梭质粒pAdTrack巨细胞病毒 (CMV)启动子下游 ,构建重组穿梭载体pAdTrack CMV IL 10 ,线性化后与AdEasy 1电穿孔共转化BJ5 183,获得重组腺病毒质粒pAdIL 10。pAdIL 10用Lipo fectamin包装转染HEK 2 93细胞 ,获得重组腺病毒AdIL 10。将AdIL 10体外感染HSC ,3d后抽提HSC总RNA ,以RT PCR检测IL 10的表达。结果通过酶切和测序法筛选出pAdIL 10 ;经 2 93细胞包装 ,3d后观察到绿色荧光蛋白 (GFP)表达 ;AdIL 10感染HSC3d后观察到GFP表达 ,通过RT PCR可检测到IL 10的表达。结论利用AdEasy系统可制备重组腺病毒AdIL 10 ;AdIL 10感染HSC后可表达IL