细胞自噬对腺花素诱导人肝细胞癌Bel-7402细胞死亡的影响

摘要

目的 探讨细胞自噬在腺花素诱导的人肝细胞癌(HCC) Bel-7402细胞死亡中的作用.方法 以9μmol/L的腺花素处理Bel-7402细胞0、0.5、1、2、4、6、8、12、24 h,Western blotting检测自噬相关蛋白Beclin-1 和LC3的蛋白表达.采用免疫荧光方法检测9μmol/L腺花素处理0、2、4h的Bel-7402细胞中内源性LC3蛋白的表达分布情况.通过建立特异性干预Beclin-1基因表达的细胞系,利用Western blotting分析及光学显微镜观察Beclin-1低表达对腺花素诱导的自噬活性改变以及细胞生长抑制和死亡的影响.利用CCK-8方法检测野生型和ATG5缺失(ATG5-/-)小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)对于不同浓度的腺花素诱导的细胞生长抑制效应,通过比较半数抑制浓度(IC50),分析ATG5基因沉默MEFs与野生型MEFs的腺花素敏感性差异.结果 Western blotting和免疫荧光检测结果显示,腺花素显著增强Bel-7402细胞的自噬活性.敲除Beclin-1基因对腺花素诱导的细胞自噬活性增强效应及其引发的细胞死亡过程无明显影响.与野生型MEFs比较,ATG5-/-MEFs对腺花素诱导的细胞生长抑制效应更为抵抗.结论 腺花素能够显著增强Bel-7402细胞的自噬活性,并促进其诱导细胞死亡的发生,但自噬活性的增强并不依赖Beclin-1的表达.