Dip法获得转反义磷脂酶Dγ(PLDγ)基因拟南芥植株

摘要

在含反义PLDγ基因的质粒根癌农杆菌的介导下 ,以生长到初果期的健壮拟南芥植株为转基因材料 ,用Dip法进行转基因实验 ,对影响转化率的浸染条件进行了比较研究。适宜的转化条件是将拟南芥的整个花序浸泡于农杆菌悬浮液中 (含 5 %蔗糖 ,0 .0 4 %吐温 - 80 ) ,每次浸染 10min ,间隔 3天浸染一次 ,共浸染 3次。每次浸染后将植株横放于暗箱中 2 4h ,再置于 2 2～ 2 4℃的光照下正常生长。待种子收获后在含有卡那霉素 70mg L的选择培养基中选择转化植株。PCR及PCR -Southernblot分析检测 ,该方法的转化率每 10 0粒种子可高达 2 %。