miR-9-5p调控雄激素受体的表达促进卵巢颗粒细胞增殖

摘要

目的 分析微小RNA-9-5p(miR-9-5p)在多囊卵巢综合征(PCOS)中的诊断价值,并探讨对卵巢颗粒细胞(KGN)增殖的作用机制.方法 采用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析miR-9-5p在50例PCOS患者(实验组)及50例健康女性(对照组)血清中的表达特征.采用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-9-5p在诊断PCOS中的曲线下面积(AUC)、特异度及敏感度.培养KGN细胞并分为空白组、阴性转染组及转染组,分别采用MTT及流式细胞技术检测干扰miR-9-5p后KGN增殖和细胞周期的变化.利用双荧光素酶报告基因实验检测miR-9-5p对雄激素受体(AR)的直接调节作用.采用western blot技术分析干扰miR-9-5p后KGN中AR蛋白表达水平的变化.结果 与对照组相比,miR-9-5p在PCOS患者血清中的表达显著升高(P＜0.05).ROC显示,miR-9-5p在诊断PCOS中AUC为0.76,敏感性为65.43％,特异性为74.09％.与空白及阴性转染组相比,转染拮抗剂后KGN中miR-9-5p表达水平显著降低(P＜0.05).干扰miR-9-5p显著降低KGN增殖(P＜0.05),并抑制细胞周期G1到S期的转变,表现为GO/G1期细胞比例增加,而S期细胞比例减少.双荧光素酶报告基因实验显示,AR是miR-9-5p的靶基因,miR-9-5p可直接与AR mRNA 3'-非编码区互补结合而降低KGN中AR蛋白的表达水平.结论 miR-9-5p在PCOS患者血清中表达上调,并可能是一种新的PCOS诊断标志物.在机制上,miR-9-5p通过直接调控AR而促进KGN增殖.