以壳聚糖纳米微球为载体的Crisp1-DNA避孕疫苗的制备及体外表达

摘要

目的 构建以壳聚糖纳米微球为载体的Crisp1 DNA疫苗,对其物理学、生物学活性进行测定,并评估其在COS-7细胞中的表达情况及细胞毒性. 方法 采用本实验室前期构建的真核表达质粒pcDNA3.1-Crisp1,以复凝法制备载Crisp1 DNA疫苗的壳聚糖纳米粒(CS/DNA NPs),用透射电镜以及凝胶阻滞分析对其相关物理学、生物学活性进行测定,然后将载Crisp1 DNA疫苗的壳聚糖纳米粒转染至COS-7细胞,检测其细胞毒性,并用间接免疫荧光法鉴定其在细胞内的表达情况. 结果 透射电镜结果显示纳米粒形态较均一,平均粒径为189.3 nm,Zeta电位约为+0.2 mV.凝胶阻滞分析显示壳聚糖微粒可将DNA疫苗完全阻滞于加样孑孔中并保护DNA质粒不降解.MTT试验显示壳聚糖组细胞存活率显著高于脂质体组(P＜0.01).间接免疫荧光实验结果显示CS/DNA NPs能在COS-7细胞中有效表达Crisp 1抗原蛋白. 结论 由壳聚糖纳米微球介导的Crisp1 DNA疫苗,可在真核细胞中有效地表达,且具有较小的细胞毒性,为进一步发展安全有效的DNA避孕疫苗打下了基础.