乳铁蛋白酶免疫分析法的建立及乳品含量检测的初步应用

摘要

目的:建立乳铁蛋白(LF)酶免疫分析法,检测LF在血清及乳汁中的水平.方法:用人源的LF多次免疫兔,获得高效价的抗体.纯化后包被成固相酶标板,以识别并结合待测标本中的LF.用生物素标记抗原(Bio-AS),同辣根酶标记亲和素(HRP-A)可特异结合.向固相酶标板中同时加入Bio-AS和不同浓度的标准品,37℃反应1.5h.洗涤后以HRP-A为探针,经酶底物显色后可获得良好的ELISA竞争抑制曲线.结果:该法测定范围:(0.36～9.00)μg/ml,最低检出量0.25μg/ml,批内和批间误差分别为<6.3%和7.4%.用该法测正常献血员(40名)血清LF水平为(0.438±0.183)μg/ml;人初乳(5名)水平为(7.82±0.51)ms/ml.血清和初乳中的LF经65℃30min处理后活性不变,经100℃ 3min处理明显降解.结论:该法稳定、简便、特异适于检测人血清和乳汁中的LF水平.