优化感受态细胞制备方法提高转化效率的研究

摘要

通过研究不同生长状态、处理溶液、保存时间及热激时间对感受态细胞制备的影响,分析了影响大肠杆菌株JM109和DH5α感受态细胞形成因素,优化了制备感受态细胞的方法。结果表明,OD600为0.43的大肠杆菌菌液经处理液(20 mmol/L MgCl2+80 mmol/L CaCl2)处理,-85℃放置12～14 h,42℃热激处理90 s,转化效率最高,可达5.5×105～6×105 cfu/μg DNA(pSilencer2.1-U6-neo),随着质粒放置时间增加,转化效率下降。