抗凋亡蛋白ARC对高糖诱导的大鼠心肌细胞凋亡影响及其机制

摘要

目的探讨具有半胱天冬酶募集域的凋亡抑制因子(ARC)对高糖诱导的大鼠心肌细胞(H9c2细胞)凋亡的影响及其作用机制。方法用含高浓度葡萄糖(50 mmol/L)的培养液分别处理H9c2细胞3、6、12、24 h,观察高糖对ARC、P53表达的影响。应用Tunel染色和caspase3/7活性分析检测敲低或过表达ARC对高糖诱导的H9c2细胞凋亡的影响。应用荧光显微镜和酶标仪检测过表达ARC对H9c2细胞中活性氧(ROS)和线粒体膜电位的影响。高糖处理前敲低P53,检测P53和ARC之间的靶向关系。腹腔注射链脲佐菌素诱导小鼠糖尿病,采用Western blot法检测小鼠心肌组织中ARC蛋白表达水平。结果与正常培养的H9c2细胞相比,用含50 mmol/L葡萄糖培养液处理3~24 h可下调H9c2细胞中ARC蛋白的表达(F=612.9,P<0.05),上调P53蛋白的表达(F=8.0,P<0.05)。过表达ARC可以抑制高糖诱导的H9c2细胞凋亡(F=155.9,t=11.53,P<0.05),敲低ARC可以增强高糖诱导的H9c2细胞凋亡(F=807.2,t=17.04,P<0.05)。过表达ARC可以抑制高糖处理引起的ROS增加(F=991.3,t=26.81,P<0.05)和线粒体膜电位增加(F=1153.0,t=34.38,P<0.05)。与健康小鼠相比,糖尿病小鼠心肌组织中ARC的表达增加(t=7.507,P<0.05)。结论抗凋亡蛋白ARC能够通过线粒体途径抑制高糖诱导的H9c2细胞凋亡。