微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因在大肠杆菌中的表达

摘要

构建含微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因的原核表达载体并表达,表达产物为进一步研究该蛋白的功能及特性提供材料.从微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因重组pMD-18T质粒中经hindⅢ和BamH Ⅰ双酶切回收目的片段,定向亚克隆入高效原核表达载体pET-28b(+)中,构建重组表达质粒,并转化入DE3菌中.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达蛋白.经PCR、酶切鉴定表明,构建了开放阅读框完整的微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因的原核表达质粒pET-L-dsRNA,经IPTG诱导后菌体裂解液上清SDS-PAGE分析显示与预期大小相符的约62000 Mr特异蛋白条带.成功的在原核表达系统中表达了微小隐孢子虫病毒L-dsRNA基因蛋白,可用于进一步研究该蛋白的功能和特性.