新生大鼠海马神经元的原代培养与鉴定

摘要

目的:探讨建立简便高效的大鼠海马神经元原代培养的纯化方法.方法:(1)离体培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,每天在倒置相差显微镜下进行神经元的形态学观察;(2) MTT法检测培养不同时间段神经元的活力变化,并绘制生长曲线;(3)纯化培养9d神经元利用免疫荧光染色法检测β-微管蛋白Ⅲ(β-tublinⅢ)的表达率.结果:(1)倒置相差显微镜下观察原代培养的海马神经元,刚分离种植时可见神经细胞为圆形,24h大多数细胞贴壁,3d细胞突起增大、增粗,培养5～7d神经元胞体丰满,突起交织成的网络更密集,培养14 ～ 16 d后,神经元开始退化;(2)生长曲线结果发现海马神经元体外培养经历了4个时期,即生长潜伏期、对数生长期、平台期、生长停滞期;(3)经β-tublinⅢ鉴定海马神经元纯度为(93.0％±2.5％).结论:本实验方法步骤简便,可获得纯度较高的海马神经元,为研究与海马神经元相关的疾病提供了实验基础.