隐丹参酮对肝癌细胞凋亡的影响及其机制

摘要

目的探讨隐丹参酮(CPT)对HepG2细胞凋亡的影响及其机制。方法采用MTT试验检测终浓度为0、1、5、10、20、40、100μmol/L的CPT对HepG2细胞活性的影响,并计算出CPT对HepG2细胞的半数致死浓度(IC 50)。将HepG2细胞分为A~D组,分别使用终浓度0、1、5、10μmol/L的CPT培养48 h,分别通过划痕实验、JC-1染色和流式细胞术检测各组HepG2细胞的迁移能力、线粒体膜电位以及细胞凋亡率。将HepG2细胞分为E~H组,分别使用含有0μmol/L CPT+20μmol/L Spautin-1、1μmol/L CPT+20μmol/L Spautin-1、5μmol/L CPT+20μmol/L Spautin-1、10μmol/L CPT+20μmol/L Spautin-1的培养液培养。采用MTT实验检测E~H组处理48 h时的细胞活性,Western blot方法检测A、D、H组处理48 h时HepG2细胞中LC3B-Ⅱ蛋白的表达情况,JC-1染色检测A、D、E、H组处理48 h时的细胞线粒体膜电位,流式细胞术检测A、D、E、H组处理24 h时的细胞凋亡情况。结果随着CPT浓度的递增,HepG2细胞活性明显下降,处理48 h时的IC 50值为3.9μmol/L。随着CPT浓度的升高,抑制HepG2细胞迁移的能力逐渐增强(t=5.96~29.63,P<0.05);绿色荧光与红色荧光比值也逐渐升高(t=4.24~23.36,P<0.05);HepG2细胞的细胞凋亡率逐渐增高(t=7.30~18.15,P<0.05)。A~H组间比较,细胞活性均有显著性差异(F=231.15,P<0.05),E~H与A~D组相比,细胞活性增高(t=3.96~18.80,P<0.05)。H组与D组相比,自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ蛋白表达显著降低(t=3.52,P<0.05)。JC-1染色结果显示,E组、H组与D组比较绿色荧光与红色荧光比值均有显著差异(t=3.58、14.76,P<0.05)。流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示,E组、H组与D组比较绿色荧光与红色荧光比值均有显著差异(t=12.38、4.99,P<0.05)。结论CPT可能通过诱导自噬从而促进HepG2细胞的凋亡,达到对HepG2细胞活性的抑制作用。