人滋养层干细胞的分离培养与鉴定

摘要

目的建立可在体外培养的人滋养层干细胞系(hTSCs),为研究胎盘的发育机制提供新的模型。[HTH]方法[HTSS]取临沂市妇幼保健院生殖医学科患者捐赠的发育正常的5~6 d囊胚,利用延时培养技术分离获取hTSCs,进行细胞核型分析,利用免疫荧光技术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测hTSCs标记物的表达,并对hTSCs的侵袭能力、分化能力以及内分泌功能进行检测。[HTH]结果[HTSS]本实验成功建立4株hTSCs,其均具有正常细胞核型。免疫荧光技术检测显示,第8代hTSCs中转录因子活化蛋白2C(TFAP2C)、细胞角蛋白7(CK7)、转录因子GATA结合蛋白3(GATA-3)稳定表达;RT-qPCR检测结果显示,第8、16代hTSCs中CK 7、GATA 3、TFAP 2 C、TEAD 4基因的相对表达量无显著性差异(P>0.05);分化组第2、4、6天穿过trasnswell微孔的细胞数量均多于未分化组(F=53.31~234.55,P<0.05);第4、6天分化组穿过trasnswell微孔的细胞表达GCM1的比例均高于未分化组(F=50.25,131.13,P<0.05);分化组中CK 7、SDC-1、β-hCG和ITGA 5基因的相对表达量均显著高于未分化组(t=-6.78~-2.51,P<0.05);分化组第2、4、6天培养基中雌二醇、孕酮浓度均高于未分化组(F=25.06~225.62,P<0.05)。[HTH]结论[HTSS]本研究成功分离获取的hTSCs具有正常核型,均表达hTSCs特异标记物,其侵袭能力、分化能力及分泌功能等与人类早期胎盘滋养层细胞相似。这将为进一步研究人类滋养层细胞的发育和功能提供有力的工具。